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PCR八联管在实验中可为我们带来的几个优势
来源: | 作者:muchen | 发布时间: 2021-09-26 | 1115 次浏览 | 分享到:
我们在使用完PCR八联管试剂盒是需要清洗的,有一些净化PCR八联管清洗套件的方法,在使用过程中需要注意的内容有哪些?

我们在使用完PCR八联管试剂盒是需要清洗的,有一些净化PCR八联管清洗套件的方法,在使用过程中需要注意的内容有哪些?


实验方法原理:硅胶膜在高盐条件下结合DNA,可在低盐条件下与DNA分离。用于清洁目的的含DNA溶液中的引物,单核苷酸,酶,矿物油,盐离子等被分离,因为它们与DNA没有相似的性质。


实验材料:PCR产物,试剂,试剂盒,PCR清洁套件,仪器,消耗品,96孔DNA制备板96孔深孔板96孔V形板。


一、PCR八联管厂家谈试剂盒的组成,储存,稳定性


1、说明书,消耗品:96孔DNA制备板,96孔1.6ml深孔板,96孔V形板。

2、缓冲液PCR-A:DNA结合溶液。在室温下以密封状态储存。如果发生沉淀,应将其溶解在65°C的温浴中,并在使用前冷却至室温。

3、缓冲液W2浓缩液:除去盐溶液。使用前,根据瓶子上指定的体积加入乙醇,充分混合,并在室温下保存。可以使用100%乙醇或95%无水乙醇。

4.洗脱液:2.5mM Tris-HCl,pH 8.5,在室温下以密封状态储存。


二、PCR八联管厂家谈操作步骤


用户可以选择负压或离心。


A.负压法

1、正确连接负压装置,将96孔DNA制备板放在负压装置上;在PCR,酶消化,酶标记或测序反应溶液中加入3倍缓冲液PCR-A(如果缓冲液PCR-A小于100μl,加入100μl);充分混合并转移至96孔DNA制备板,打开并调节负压至-25-30英寸汞柱,并缓慢吸出板中的溶液。

2、加入0.3 ml缓冲液W2并吸收溶液。用相同的方法用0.3ml缓冲液W2洗涤两次。确认在试剂瓶上的指定体积的缓冲液W2浓缩物中加入无水乙醇。

3、维持负压并提取96孔DNA制备板10分钟。

4、在长纤维组织上将96孔DNA制备板粉碎6次,引流管朝下。

5、将96孔DNA制备板置于96孔V形板上,加入25-30ul水或洗脱至膜中心,在室温下静置1分钟。通过以3 000×g离心5分钟洗脱DNA。


B.离心

1、在PCR,消化,酶标记或测序反应中加入3倍体积的Buffer PCR-A(如果Buffer PCR-A小于100μl,加100μl);混合并转移到制备板96孔中的96孔DNA中。将DNA制备板置于96孔1.6ml深孔板中,以1000×g离心1分钟,弃去滤液。

2、在96孔DNA制备板中,加入0.3ml缓冲液W2,以1000×g离心1分钟,弃去滤液。用0.3ml缓冲液W2以相同方式再次洗涤。确认在试剂瓶上的指定体积的缓冲液W2浓缩物中加入无水乙醇。

3、将96孔DNA制备板置于96孔1.6ml深孔板中,并以3 000×g离心10分钟。

4、将96孔DNA制备板置于干净的96孔V形底板中,加入25-30ul水或洗脱至膜中心,在室温下静置1分钟。通过以3 000×g离心5分钟洗脱DNA。


PCR八联管厂家谈注意事项:

1、将洗脱液或水加热至65°C有助于提高洗脱效率。

2、DNA分子是酸性的,建议储存在2.5 mM Tris-HCl,pH 8.5洗脱液中。


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