新闻资讯

产品线涵盖分子生物、细胞培养、样品处理、微生物学、样品冻存、免疫检测、核酸提取、蛋白纯化、食品检测等方面,为客户提供品质产品及专业技术服务。

免疫磁珠技术问题
来源: | 作者:muchen | 发布时间: 2021-08-05 | 90 次浏览 | 分享到:
免疫沉淀磁珠在洗脱了抗原之后,如何回收处理磁珠?
答:免疫沉淀磁珠为一次性使用,不建议回收磁珠,否则可能影响下一次测试。

免疫沉淀磁珠  
1.免疫沉淀磁珠在洗脱了抗原之后,如何回收处理磁珠?
答:免疫沉淀磁珠为一次性使用,不建议回收磁珠,否则可能影响下一次测试。

2.IP 试剂盒是否适合做抗体纯化?
答:不建议将 IP 试剂盒用于抗体纯化。

3.纯化得到的抗体体积较少,用透析除盐的方法可能损失较大,还有没有其他方法除盐?
答:纯化得到的抗体,还可以用超滤的方法除盐。

4.一次反应可以结合多少抗体?
答:一次反应为100μL磁珠悬液,结合抗体的量为30μg。

链霉亲和素磁珠
1.保存溶液是什么?
答:1×PBS,含0.1%(v/v)Tween -20,0.1%(w/v)NaN3。

2.保质期多久?
答:保质期为1年。

3.抗体结合量多少?
答:抗体结合量>20μg/mg beads。

4.链霉亲和素磁珠的结合能力?
答:游离生物素结合量为1000 pmol/mg beads
生物素化单链寡核苷酸结合量为400 pmol/mg beads
生物素化IgG结合量为20μg/mg beads。

5.封闭条件?
答:含1%-5% BSA的 PBST缓冲液,室温反应30min-1h。

6.能不能用于细胞分选?
答:有文献报道,可以用于细胞阴选 。细胞阳选请慎重考虑,暂无支撑数据。

7.如何将生物素标记的生物配体与SA磁珠分离?
答:方法一:0.1% SDA,煮沸5min;
方法二: pH=8.2,含95%甲酰胺的10mM EDTA中,65℃ 5min或者90℃ 2min。 脱落率95%。

NHS 磁珠
1.Mag NHS的抗体偶联量多大?
答:偶联量>30μg IgG/mg磁珠
       偶联量为35-71μg  protein A/mg磁珠。

2.抗体中含0.02% NaN3是否需要去除?如何去除?
答:NaN3虽然会对抗体跟磁珠的结合形成竞争。一般情况下,小于0.05%NaN3的可以忽略不计。如果NaN3含量多,可以采用透析的方法去除。

3.该磁珠用于化学发光检测,空白背景值很高,具体原因?
答:不同体系磁珠的使用效果不同,对于背景值高的体系,需要采用不同的封闭体系。

4.确定合适的Coupling Buffer的实验方法和判断方法有哪些?
答:为方便实验操作,可以采用原蛋白保存溶液,必须不含有氨基小分子。一般采用PBS或者MES。

5.对于免疫沉淀实验,背景高怎么解决?
答:采用1~5%BSA封闭。

6.Mag NHS开封使用后,一周后使用,发现偶联效果明显降低,是否是因为NHS基团降解?
答:该磁珠只要密封保存4℃冰箱即可,不会存在明显的基团水解情况。偶联效果降低主要跟实验操作过程相关。建议重复实验。

7.确定合适的偶联蛋白浓度的实验方法和判断方法有哪些?
答:Mag NHS磁珠的IgG偶联量为30μg/mg磁珠。取1mg磁珠作为反应量时,加入IgG的量为45μg-60μg左右。并且配制IgG溶液的体积越少越好,但要保证磁珠能够分散。

8.Mag NHS和Magrose NHS磁珠怎么选择?
答:Mag NHS磁珠灵敏度高,用于检测、免疫沉淀实验。Magrose NHS磁珠载量高,用于纯化方向。


​新闻分类
热门资讯
  • 暂无相关记录!